环境科学学报   2019 年 12 期

RNA是在基因表达层面探究分子生物学机制的重要研究对象。由于RNA化学性质活泼、结构不稳定,并且内外源RNA酶无处不在,如何从环境流行病学研究收集到的全血样本中提取出高质量的总RNA是困扰研究人员的一大难题。本研究的目的是建立一种能长期保存全血样本并从中提取出高质量总RNA的方法。将环境流行病学研究中采集到的少量新鲜全血立即与10倍体积的TRIzol试剂混匀后置于-80℃冰箱中,可保护RNA在长期保存过程中不发生降解。针对长期保存的全血-TRIzol混合体系,在经典的TRIzol一步法基础上,无需将全血样本分装至不含RNA酶的1.5 mL离心管,直接在较大操作空间(不含RNA酶的15 mL离心管)中进行总RNA相分离、沉淀、洗涤等操作,并在总RNA晾干前再增加离心并吸取少量残留液体操作,缩短自然晾干时间。本方法无需离心、分离血浆、裂解红细胞等繁杂的前处理步骤,极大简化操作步骤,减少采样工作量,实现了对全血样本的低成本长期保存。通过增大操作空间、改进晾干操作,本方法显著提高了总RNA样本的完整性和纯度。使用本方法提取出保存一年的全血总RNA产率为(9.18±2.10)μg·mL~(-1),完整性指标RIN值和28S/18S分别为(8.98±0.18)和(1.08±0.08),纯度指标OD260/OD280和OD260/OD230分别为(2.18±0.04)和(1.70±0.00)。保存两年的全血提取出总RNA的产率、完整性及纯度仍然可以满足下游实验要求。