中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会

2015-07-25 00:00:01

中国黑龙江哈尔滨

目的:兔球虫病是一类严重危害养兔业发展的寄生虫病,当前尚无安全有效的疫苗用于该病防控。因此我们尝试寻找兔肠艾美耳球虫具有良好免疫原性的蛋白。方法:从兔肠艾美耳球虫(Eimeria intestinalis)孢子化卵囊中提取总RNA,通过RT-PCR方法获得cDNA;利用简并引物(根据鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)、刚第弓形虫(Toxoplasma gondii)和犬新孢子虫(Neospora caninum)的profilin基因ORF序列设计):对cDNA进行扩增以获得肠艾美耳球虫profilin基因ORF序列;利用Genome Walking的方法,在基因组上水平上获得该基因的全长序列;将ORF序列克隆入pET-28a表达载体,转入Transetta(DE3)表达菌进行表达。结果:本研究成功获得了兔肠艾美耳球虫profilin基因ORF编码序列,长度为522 bp,编码173个氨基酸;利用Protein Smart软件分析,确定其为profilin蛋白家族成员;经过Blast比对,其与柔嫩艾美耳球虫、弓形虫和新孢子虫的profilin基因ORF编码序列和氨基酸序列的同源性分别为64.58%、48.67%、48.91和64%、39.43、39.43%。利用Genome Walking的方法,我们确定该基因的全长为1277bp,共包含3个外显子和2个内含子。经IPTG诱导后,成功对该蛋白进行了原核表达,SDS-PAGE电泳显示该蛋白大小约23 kDa。结论;本研究成功表达了兔肠艾美耳球虫profilin蛋白,对今后研究家兔抗球虫免疫和相关疫苗的开发有着重要的意义。