浙江大学医学院附属第一医院

2004

1998年1月1日～2002年12月30日，由浙江省医药卫生重点基金、浙江省自然科学基金、浙江省教育厅科研基金、国家自然科学基金等资助，进行了研究。革兰阴性杆菌对第三代头孢菌素耐药是当今耐药机制研究中的重要问题。致使第三代头孢菌素耐药的主要原因是细菌产生超广谱β-内酰胺酶(Extended-spectrumβlactamases，ESBLs)及产头孢菌素酶(AmpC酶)，由此从流行情况、耐药性、检测方法、基因型表达等方面进行了研究并取得一定的进展。一、根据各种β-内酰胺酶的特点，建立了AmpC酶表型筛选检测法，该法与国际公认的三维试验法的总符合率达89.58％，且能检测出存在去阻遏突变的高产菌落，优于三维试验法。 二、对浙江省119株产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株的β-内酰胺酶基因型进行研究，有29株产SHV型酶，其中SHV-28型为国际首次发现的SHV型β-内酰胺酶，GenBank注册号为：AF299299。TEM型均为广谱酶，TEM-104及105注册号分别为AF516719和AF516720。三、通过PFGE的方法证明多重耐药肺炎克雷伯菌同属一个型，为医院感染。杭州市51株产ESBLs菌株中有50株检出各种不同ESBLs基因型，且以CTX-M型为主。其中CTX-M-22及CTX-M-24为首次发现的ESBLs基因型，GenBank注册号为：AY080894和AY143430。四、发现浙江省产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌株流行严重，对大多数抗菌药物有较高的耐药性。五、通过430例产ESBLs菌株感染患者各种因素的分析，发现最重要的危险因素是抗菌药物的不合理应用，为ESBLs的控制提供了依据。六、在144株阴沟肠杆菌抗菌药物的耐药性研究中，发现其耐药性与AmpC基因表达程度及是否产生ESBLs密切相关。七、以美国临床实验室标准化委会(NCCLS)推荐的抑制剂增强的肉汤稀释法为标准，对双纸片法(DDT)进行评价，发现双纸片法仍是一种敏感、特异、简单和经济的ESBLs检测方法，优于Vitek法。八、144株阴沟肠杆菌中有120株ampC基因阳性，阳性率达83.33％，56株产ESBLs；在120株ampC基因阳性菌株中仅36株ampC基因去阻遏突变高产表达。九、将Novagen pET表达体系引入β-内酰胺酶基因型的表达，完成了CTX-M-22表达载体的构建及在BL21(DE3)细菌中的表达。 十、研究中已培训1500多名临床医师及细菌室工作人员，并与北京、新疆、南京等地的多所医院进行协作，对合理应用抗菌素、降低医疗费用、降低革兰阴性菌感染患者的死亡率等具有重要的现实意义。