犬流感病毒NP基因在昆虫细胞中的表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立

楼晶瑶王晓丽欧阳伟夏兴霞诸玉梅潘群兴王晶宇安欣姚凌云王永山刘永杰 · 2017

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犬流感病毒

NP蛋白

杆状病毒表达系统

间接ELISA

期刊名称：

中国兽医科学 2017 年 06 期

摘要：

旨在利用昆虫细胞表达犬流感病毒(CIV)核蛋白(NP),并以此作为抗原建立检测CIV抗体的间接ELISA方法。从CIV感染的MDCK细胞中提取总RNA,用RT-PCR法扩增NP基因,连接到pFastBacHTA载体上,转化含Bacmid的DH10Bac感受态细胞,获得穿梭质粒NP-DH10,穿梭质粒转染sf-9昆虫细胞,获得重组病毒P1-NP。病毒传至第3代后,用Western-blot及IFA鉴定昆虫细胞表达的蛋白与兔抗犬流感病毒NP蛋白多克隆抗体及鼠抗CIV血清发生特异性反应。NP蛋白纯化后作为...