中国农业科学技术出版社

中国植物病理学会2017年学术年会

2017-07-25 00:00:01

中国山东泰安

苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)是我国栽培梨上普遍携带的一种病毒。miRNA是一类非编码21-24nt小RNA,在转录水平或翻译水平上通过调控靶基因进而对植物生长发育、信号转导、抗病抗逆中起重要调控作用。前期研究经小RNA高通量测序发现并获得了ASGV感染条件下砂梨(Pyrus pyrifolia)茎尖部位表达的一些保守的miRNAs以及梨特有的新的miRNAs。已有文献报道miR397a通过靶标漆酶基因在维管束细胞壁形成,木质素合成中发挥功能。为探究病毒感染条件下PpmiR397a在梨中的功能,本研究选取了砂梨金水二号小RNA文库中生物信息学分析存在的miR397a(命名为PpmiR397a),采用茎环引物反转录法(Stem-loop RT-PCR)对PpmiR397a成熟体进行了克隆鉴定。预测PpmiR397a前体在梨基因组DNA上的位置,克隆获得相应的前体序列,对其进行克隆,构建了PpmiR397a超量表达载体,为探究PpmiR397a在梨中基因功能提供材料。进而采用RLM-RACE法验证了PpmiR397a与梨漆酶家族成员Lac4基因(命名为Pp-Lac4)在miRNA结合处的第10和第11位碱基间存在靶标切割关系,克隆获得了Pp-Lac4基因的CDS序列,明确其在漆酶家族中的分类地位。结合有毒和无毒梨离体植株茎尖和基部的横截石蜡切片显微观察,结合qRT-PCR对病毒感染条件下PpmiR397a及其对应的靶基因Pp-Lac4在梨不同组织部位进行表达量联合分析,结果显示,无毒梨植株茎尖和茎基部部位木质化程度均高于感染ASGV病毒植株部位,且Pp-Lac4基因不同部位表达量与木质化程度正相关,PpmiR397a与PpLac4存在负调控关系。本研究结果初步表明携带ASGV与无病毒梨植株的木质化程度差异与PpmiR397a对靶基因Pp-Lac4的调控存在一定的相关性,相关研究还在进一步试验中。