2017全国中西医结合皮肤性病学术年会

2017-04-20 00:00:01

中国广东珠海

目的:研究清肺止咳小复方对博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠是否具有抗炎及抗纤维化作用,通过细胞实验明确其作用机制。方法:采用7周龄C57BL/6小鼠,用气管插管给药方式建立博莱霉素诱导的硬皮病肺纤维化模型。对照组小鼠灌注生理盐水。将小鼠称重并随机分组为正常组、博莱霉素组、博莱霉素+参芪活血方组、博莱霉素+清肺止咳小复方组。每一大组再按预防组、治疗组分为两组。预防组(炎症期模型):小鼠气管灌注博莱霉素的前三天开始腹腔注射药物,硬皮病模型建立之后持续给药一周,以阻止抑制肺纤维化炎症,进而抑制肺纤维化的形成;治疗组(纤维化期模型):小鼠硬皮病模型建立之后第一周不予以给药,第二周开始持续给药至第三周结束,以治疗纤维化。试验后对小鼠进行称重,获取小鼠肺组织、支气管肺泡灌洗液(BALF)及血液等有效组织进行化验分析。计数BALF中总细胞及分类细胞数,通过进行组织学HE及Masson染色检测评判小鼠肺组织病理切片的炎症及肺纤维化程度,Sircol assay定量检测小鼠肺组织胶原含量,通过Real-time PCR检测肺组织炎症及纤维化相关基因表达。通过上述检测,综合评判清肺止咳复方在博莱霉素诱导肺纤维化小鼠模型中的抗炎及抗纤维化作用。体外培养肺成纤维细胞MRC-5,通过RTCA采用实时细胞分析系统明确清肺止咳小复方对成纤维细胞增殖的影响;利用Real-time PCR检测成纤维细胞胶原及促纤维化基因表达;Sircol assay检测不同处理组细胞上清中分泌性胶原蛋白含量;细胞机制方面,通过双荧光素酶报告基因检测系统检测清肺止咳小复方对SBE元件(可反映促纤维化通路TGF-β活性)及NF-κB元件(可反映炎症相关通路NF-κB活性)转录活性的影响。结果:1.清肺止咳小复方抑制博莱霉素诱导的小鼠肺组织炎症且效果优于参芪活血方;2.清肺止咳小复方抑制博莱霉素诱导的小鼠肺组织纤维化且效果优于参芪活血方;3.清肺止咳小复方抑制成纤维细胞增殖及胶原表达;4.清肺止咳小复方抑制SBE元件及NF-κB元件转录活性。