人源基因载体pHrn介导p53基因在Bel-7402中的抗癌研究（英文）

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人源基因载体

人端粒酶逆转录酶(HTERT)

P53

发表日期：

2007

摘要：

利用人源基因载体结合人巨细胞病毒(CMV)增强子,人端粒酶逆转录酶(HUMAN TELOMERASE REVERSE TRANSCRIPTASE,HTERT)启动子及肿瘤抑制基因P53构建肿瘤抑制载体,研究它们在肝癌细胞株BEL-7402中的功能.将CMV增强子(CMVE)与肿瘤特异性启动子HTERTP组合,分别结合GFP及精氨酸型和脯氨酸型肿瘤抑制基因P53,构建GFP表达载体PCHEGFP以及P53表达载体PCHP53ARG和PCHP53PRO;脂质体2000转染肝癌细胞株BEL-7402;24 H后利用荧光显微镜以及流式细胞仪检测GFP的表达;RT-PCR、蛋白质印迹检测P53基因的表达;利用HOECHST 33258、ANNEXIN V/PI染色,检测P53促使肿瘤细胞的促凋亡情况.结果表明:GFP荧光表达载体在BEL-7402细胞中能有效表达;RT-PCR及蛋白质印迹检测到精氨酸型和脯氨酸型P53基因在BEL-7402细胞内表达;HOECHST 33258染色及ANNEXIN V/PI染色检测细胞凋亡实验没有得到明显的细胞凋亡结果.结果表明:实验所构建的肿瘤抑制载体在肝癌细胞BEL-7402能有表达,并能形成外源性P53蛋白,但没有检测到明显的P53促使肝癌细胞调亡的结果.这可能与P53对HTERT的负调控作用有关.